Welke cuvette moet u gebruiken? Microvolume versus macrovolume, VIS versus UV, glas versus plastic
This post is also available in:
English (Engels) 
Français (Frans) 
polski (Pools) 
Español (Spaans)
De oplossing moet in een gespecificeerd formaat in het lichtpad van een fotometer worden geplaatst voor fotometrisch onderzoek van vloeistofmonsters. De typische keuze voor deze toepassing zijn cuvetten, dit zijn monstercontainers met optische vensters.
Afbeeldingsbron: science photo/shutterstock.com
De oplossing moet in een gespecificeerd formaat in het lichtpad van een fotometer worden geplaatst voor fotometrisch onderzoek van vloeistofmonsters. De typische keuze voor deze toepassing zijn cuvetten, dit zijn monstercontainers met optische vensters. De afstand tussen de optische vensters is nauwkeurig gespecificeerd, zodat de route van het monster in de cuvet kan worden bepaald. Zelfs als alleen die cuvetten worden onderzocht die worden gebruikt voor absorptiemetingen in het domein van UV-Vis-spectroscopie, is de selectie van verschillende soorten cuvetten uitgebreid. De vierkante kuvet is de meest voorkomende, met buitenafmetingen van 12,5 x 12,5 mm. In dit formaat zijn monsterhoeveelheden van microliter (ultramicrocuvetten) tot milliliter (macrocuvetten) ondergebracht.
De typische padlengte van een cuvette is 10 mm, maar er zijn ook cuvetten die een korter lichtpad over het monster geven. Verder verschillen cuvetten qua materiaal, hoogte en de grootte van het meetvenster.
Types of Quartz Cuvettes and Cells
Cuvetten met standaard buitenafmetingen van 12,5 x 12,5 mm maar gevarieerde minimale monstervolume-eisen.
Het soort cuvet dat moet worden gekozen, wordt bepaald door het gebruikte instrument, de aard van de toepassing en de kenmerken van het monster. Het is van vitaal belang dat cuvetten zo transparant mogelijk zijn voor de golflengten die worden gemeten, zodat het lineaire bereik van de fotometer niet wordt beperkt.
Omdat de cuvet compatibel moet zijn met het apparaat, stelt de selectie van apparatuur eisen aan de cuvet. Dit verwijst meestal naar de buitenafmetingen van de kuvet, aangezien deze in de kuvettenschacht moet passen, hoewel de hoogte van de meetvensters ook belangrijk is. Deze moeten exact zijn uitgelijnd met het lichtpad dat door het instrument gaat. Dit geldt met name voor cuvetten die bedoeld zijn om kleine hoeveelheden te meten en daardoor extreem smalle meetvensters hebben. De meest voorkomende lichtpadhoogtes zijn 8,5 mm en 15 mm.
De meetgolflengten die bij de betreffende toepassing betrokken zijn, zijn de volgende cruciale factor om te overwegen. PMMA, polystyreen en gewone glazen kuvetten zijn uitsluitend transparant in het zichtbare bereik. Cuvetten gemaakt van kwartsglas of een specifiek type plastic die voldoende transparantie geven in dit bereik, moeten worden gebruikt als golflengten in het UV-gebied, onder ongeveer 300 nm, worden gebruikt.
Verschillen in absorptiespectra van cuvetten gemaakt van verschillende materialen gemeten tussen 220 nm en 400 nm
Voor die methoden die afhankelijk zijn van reacties die plaatsvinden bij een bepaalde temperatuur en die de absorptie in de loop van de tijd kwantificeren, is verwarming en efficiënte temperatuurregeling van een monster tijdens het meetproces van cruciaal belang. In dit geval is het van cruciaal belang dat het contactoppervlak tussen de kuvetwand en de temperatuurgecontroleerde kuvettenschacht zo breed mogelijk is, naast de geschikte mate van weerstand van het materiaal. Door deze factoren hebben bepaalde cuvetten, zoals macro-cuvetten, een voordeel in temperatuurgecontroleerde toepassingen.
De aard, hoeveelheid en concentratie van het materiaal dat voorhanden is, zijn allemaal factoren die van invloed zijn op de keuze van de kuvetten. Het materiaal waaruit de cuvet is opgebouwd is grotendeels onbeduidend als het monster is gebaseerd op een waterige oplossing. Glazen kuvetten worden daarentegen aanbevolen als het om organische oplosmiddelen gaat, omdat deze een sterkere weerstand hebben dan plastic kuvetten.
Als er maar een kleine hoeveelheid monster beschikbaar is, kan het de moeite waard zijn om het opnieuw te gebruiken voor verdere metingen. In deze situatie worden plastic cuvetten voor eenmalig gebruik geadviseerd. Individueel verpakte plastic cuvetten met de juiste zuiverheidsgraad verminderen de kans op besmetting. Cuvetten, die zijn ontworpen om extreem kleine hoeveelheden te bevatten, kunnen ook worden gebruikt.
Omdat elk instrument een detectielimiet heeft, is de concentratie van een monster ook van invloed op de cuvetteselectie. Dubbelstrengs DNA kan met succes worden gemeten tot een maximale concentratie van 100 g/ml met behulp van een fotometer met een lineair meetbereik tot 2 A en een padlengte van 10 mm. Oplossingen met een hogere concentratie moeten worden verdund, of verdunning kan worden nagebootst door een cuvet met een kortere route te gebruiken. Een routelengte van 1 mm, volgens de Lambert-Beer-vergelijking, maakt metingen van dsDNA-concentraties tot wel 1.000 g/ml mogelijk.
Als de aard van de toepassing niet anders vereist, is het materiaal van de cuvet een andere optie om te overwegen. Glazen cuvetten bieden over het algemeen een hogere transparantie en meetnauwkeurigheid en kunnen meerdere keren worden hergebruikt. Kunststof cuvetten zijn daarentegen gemakkelijk en veilig te hanteren. Omdat plastic cuvetten slechts één keer worden gebruikt en niet hoeven te worden schoongemaakt, is mogelijke schade en verlies geen probleem.
