Nukleaj acidoj estas izolitaj de prova\u0135materialo kiel ekzemple \u0109eloj kaj poste utiligitaj en pliaj laboratorioeksperimentoj. Por \u0109i tiu celo, estas konsilinde determini la koncentri\u011don de la purigita DNA a\u016d RNA kaj kontroli ilian purecon. Tiamaniere, precize difinitaj kvantoj de la nuklea acido eniros la kontra\u016dfluan aplika\u0135on, kaj \u0109iuj poluadoj, kiuj povas influi senteman reagon a\u016d analizon, estas detektitaj en reala tempo.<\/p>\n\n
UV-Vis-spektrofotometrio estas facila, rapida kaj temp-testita metodo por atingi \u0109i tiujn celojn. En la intervalo de 260 nm, nukleaj acidoj montras karakterizan absorbadpinton (figuro 1). Tiu absorbadvaloro estas tial uzita por kalkuli nukleajn acidajn koncentri\u011dojn. La\u016d la le\u011do de Lambert-Beer, du parametroj estas bezonataj por la kalkulo de la koncentri\u011do de specimeno: la optika padlongo (= lumvojlongo (L)) kaj la molara formortkoeficiento (materialo kaj ondolongo-specifa konstanto) de la specimeno mezurota. La specifa faktoro (F) povas esti kalkulita kiam oni uzas norman kuveton kun malpeza vojo de 1 cm. Tiu faktoro tiam estas multobligita per la mezurita absorbadvaloro (A) por alveni \u0109e la koncentri\u011do (C) de la prova\u0135solvo. Molaj formortkoeficientoj kaj specifaj faktoroj, respektive, estas tipe haveblaj en la literaturo. La faktoro por dsDNA, ekzemple, estas 50 \u00b5g\/mL (RNA: 40 \u00b5g\/mL), kaj \u011di estas de difino ekvivalenta al unu sorba unuo. \u0109i tiuj datumoj.<\/p>\n\n Por povi fari deklaron pri la pureco de nuklea acida prova\u0135o, la absorbo \u0109e ondolongoj krom 260 nm devas esti determinita (figuro 1). La kvocientoj derivitaj de la absorbadvaloroj mezuritaj \u0109e 260 nm, 280 nm kaj 230 nm (A 260<\/sub> \/A 280<\/sub> kaj A 260<\/sub> \/A 230<\/sub> ) konsistigas la purecoproporciojn kiuj helpas identigi eblajn poluojn. Malpura\u0135oj kiel ekzemple proteinoj kaj spuroj de reakciiloj kiuj estis uzitaj dum la purigprocezo donas malsaman absorbadspektron de tiu de nukleaj acidoj kaj tiel influas la purecoproporciojn (figuro 2). La proporcio A 260<\/sub> \/A 280<\/sub> de solva\u0135oj de puraj nukleaj acidoj estos proksimume 1,8 – 2,0, dum la proporcio A 260<\/sub> \/A 230<\/sub> tipe montros valorojn en la intervalo de 2,0 – 2,5.<\/p>\n\n Kvara ondolongo estas uzata por determini la fonon. \u011ci estas mezurita je a\u016d super 320 Nm \u0109ar nek nukleaj acidoj nek organikaj polua\u0135oj sorbas lumon \u0109e tiu ondolongo. Sorbaco mezurita en \u0109i tiu intervalo povas indiki la \u0109eeston de partikloj a\u016d aervezikoj ene de la prova\u0135o. E\u0109 makulita kuveto kapablas ellogi fonan legadon. Modernaj fotomezuriloj ofertas la opcion de aktivigo de fon\u011dustigtrajto kiu efikos a\u016dtomatan subtraho de iu fonsorbado de \u0109iuj aliaj mezurvaloroj.<\/p>\n\n Krome, la kompleta spektro de nuklea acida prova\u0135o povas esti kaptita (tipe inter 220 kaj 320 nm). Komparoj kun la spektro akirita de pura nuklea acida solva\u0135o ebligos la detekton de eblaj eraroj dum la mezurprocezo same kiel la \u0109eeston de polua\u0135oj ene de la prova\u0135o.<\/p>\n\nLe\u011do de Lambert-Beer:<\/strong> C = Koncentri\u011do ![\"\"](\"https:\/\/cotslab.com\/wp-content\/uploads\/2021\/10\/csm_Figure_One_Rahmen_b55fd8fbd6.jpg\")
![\"\"](\"https:\/\/cotslab.com\/wp-content\/uploads\/2021\/10\/csm_Figure_Two_Applications_389bfe613c.jpg\")